更新時間：2025-07-02 
瀏覽次數：636超敏版人腫瘤壞死因子α(TNF-α) 酶聯免疫吸附測定試劑盒
腫瘤壞死因子α（ TNF-α) 簡介：
腫瘤壞死因子α（ TNF-α) 由中性粒細胞、活化的淋巴細胞、 巨噬細胞、NK 細胞、LAK細胞、星形膠質細胞內皮細胞、平滑肌細胞和一些轉化細胞產生。 小鼠TNF-α以膜錨定的形式出現。 自然發生的TNF-α形式是糖基化的 ，但非 糖基化的重組TNF-α具有相當的生物活性。人類和鼠類的TNF-α在氨基酸水 平上顯示出大約79%的同源性。
實驗原理：
本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯免疫吸附試驗（ ELISA） 。往預先包被有人 腫瘤壞死因子α(TNF-α)捕獲抗體的微孔中，依次加入樣本、標準品、生物素標 記的檢測抗體 ，HRP酶結合物 ， 中間經過溫育和洗滌 ， 用底物TMB顯色 ， TMB在過氧化物酶(HRP)的催化下轉化成藍色 ，并在酸的作用下轉化成最終的 黃色。顏色的深淺和樣本中的人腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（ OD值） ，計算樣本濃度。
靈敏度：7.65pg/mL
特異性：可檢測樣本中人的TNF-α , 且與其類似物無明顯交叉反應。
檢測范圍： 15.62-1000pg/mL
樣本稀釋：
請提前預估樣本的濃度范圍 ，如果您的檢測樣本需要稀釋 ，參考稀釋方案如下：
稀釋 100 倍：一步稀釋。取 5μL 樣本到 495μL 通用稀釋液內 ，做 100 倍稀釋；
稀釋 1000 倍 ：兩步稀釋。取 5μL 樣本到 95μL 通用稀釋液內 ，做 20 倍稀釋 ， 再取 5μL 20 倍稀釋樣本到 245μL 通用稀釋液內 ， 做 50 倍稀釋 ， 總共稀釋 1000 倍；
稀釋 100000 倍 ：三步稀釋。取 5μL 樣本到 195μL 通用稀釋液內 ，做 40 倍稀 釋 ，再取 5μL 40 倍稀釋樣本到 245μL 通用稀釋液內 ，做 50 倍稀釋 ，最后取 5 μL 2000 倍稀釋樣本到 245μL 通用稀釋液內 ，做 50 倍稀釋 ，總共稀釋 100000 倍；每步稀釋時取液量不少于 3μL ，稀釋倍數不超過 100 倍。每步稀釋都需混合均 勻 ，避免起泡。
1. 從室溫平衡10分鐘后的鋁箔袋中取出所需板條 ，剩余板條用自封袋密封 放回4℃。
2. 加樣 ：分別將樣本或不同濃度標準品按照100μL每孔加入相應孔中 ，空 白孔加入100μL通用稀釋液。蓋上封板膜后37℃溫育60分鐘。（建議：
將待測樣本用通用稀釋液稀釋1倍后再加入酶標板內測試。從而減 少基質效應對測試結果的影響 ，最后計算樣本濃度時需乘以對應的稀釋 倍數。所有的待測樣本和標準品在檢測中建議設立復孔）。
3. 加生物素化檢抗 ：取出酶標板 ，棄去液體 ，不用洗滌。每孔直接加入
100μL生物素化檢抗工作液 ，蓋上封板膜后37℃溫育60分鐘。
4. 洗板 ：棄去液體 ，每孔加入300μL 1x洗滌液 ，靜置1分鐘 ，甩去洗滌液， 吸水紙上拍干 ，如此重復洗板3次（也可用洗板機洗板）。
5. 加酶結合物工作液 ：每孔加入100μL酶結合物工作液 ，蓋上封板膜后 37℃溫育30分鐘。
6. 洗板 ：棄去液體按步驟4洗滌方法 ，洗板5次。
7. 加底物 ：每孔加入90μL底物(TMB) ，蓋上封板膜 ，37℃避光溫育15分鐘。
8. 加終止液 ：取出酶標板 ，每孔直接加入50μL終止液 ，立即在450nm波長 處測定各孔的OD值。
結果判斷：
1. 計算標準品和樣本復孔的平均 OD 值并減去空白孔的 OD 值作為校 正值。 以濃度為橫坐標 ，OD 值為縱坐標 ，在雙對數坐標紙上繪出四參 數邏輯函數的標準曲線。
2. 若樣本 OD 值高于標準曲線上限 ，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度 時乘以相應的稀釋倍數。
典型數據和參考曲線：
以下數據和曲線僅供參考 ，實驗者需根據自己的實驗建立標準曲線。
濃度(pg/mL) | 1000 | 500 | 250 | 125 | 62.5 | 31.25 | 15.62 | 0 |
OD 值 | 2.22 | 1.43 | 0.87 | 0.52 | 0.34 | 0.27 | 0.22 | 0.08 |
校正 OD 值 | 2. 14 | 1.35 | 0.79 | 0.44 | 0.26 | 0.19 | 0. 14 |
- |
注意 ：本圖僅供參考 ，應以每次實驗數據所繪制標準曲線計算樣本含量。
1. 重復性 ：板內變異系數小于 10% ，板間變異系數小于 10%。
2. 回收率 ：在選取的健康人血清、血漿和細胞培養上清中加入 3 個不同 濃度水平的人TNF-α , 計算回收率。
樣本類型 | 范圍（ %） | 平均回收率（ %） |
血清(n=8) | 85-101 | 96 |
血漿(n=8) | 92-104 | 102 |
細胞培養上清(n=8) | 96-108 | 107 |
3. 線性稀釋：分別在選取的4份健康人血清、血漿和細胞培養上清中加入
高濃度人TNF-α , 在標準曲線動力學范圍內進行稀釋 ，評估線性。
稀釋比例 | 回收率（ %） | 血清 | 血漿 | 細胞培養上清 |
1 ：2 | 范圍 | 84-98 | 88-96 | 90-110 |
平均回收率 | 91 | 93 | 99 | |
1 ：4 | 范圍 | 89-103 | 90-108 | 105-115 |
平均回收率 | 94 | 98 | 111 |
名稱 | 5×96孔配置 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
預包被 96 孔酶標板 Pre-coated Assay Plate | 5×8 孔×12 條 | 8 孔×12 條 | 8 孔×6 條 | 無 |
標準品 Standard | 10 支 | 2 支 | 1 支 | 按說明書 進行稀釋 |
通用稀釋液 Universal Diluent | 10×20mL | 2×20mL | 1×20mL | 無 |
濃縮生物素化檢抗 100× Biotin-antibody (100×) | 5×120μL | 120μL | 60μL | 按說明書 進行稀釋 |
濃縮酶結合物 100× Streptavidin-HRP (100×) | 5×120μL | 120μL | 60μL | 按說明書 進行稀釋 |
20×洗滌液 Wash Buffer (20×) | 10×10mL | 2×10mL | 1×10mL | 按說明書 進行稀釋 |
底物（ TMB） TMB Substrate | 5×10mL |
10mL |
5mL | 無 |
終止液 Stop Solution | 5×6mL |
6mL |
3mL | 無 |
封板膜 Plate Sealer | 20 張 | 4 張 | 4 張 | 無 |
說明書 Instruction Manual | 1 份 | 1 份 | 1 份 | 無 |
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